酶聯(lián)免疫吸附實驗用于標記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性：有高度的活性和敏感性，在室溫下穩(wěn)定反應產(chǎn)物易于顯現(xiàn)，能商品化生產(chǎn)。如今應用較多的有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP應用*。
酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測抗原的方法有以下三點：
1、雙抗體夾心法
屬于非競爭結(jié)合，檢測抗原常用的方法，檢測含有至少兩個抗原決定簇的多價抗原。原理是先將特異性抗體與固相載體連接;加入待測標本，形成固相抗原抗體復合物;再加入酶標抗體形成雙抗體夾心，洗滌;加底物顯色，根據(jù)顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量檢測。
2、雙位點一步法
針對抗原分子上兩個不同且空間距離較遠的決定簇，包被使用一種單抗，酶標記使用另一種單抗。測定時將待測抗原和酶標抗體同時加入，溫育、洗滌，加入底物顯色。若待測抗原濃度過高時，過量的抗原可分別同固相抗體和酶標抗體結(jié)合而抑制夾心復合物的形成，出現(xiàn)鉤狀效應，顯色降低，甚至假陰性。必要時可將標本經(jīng)過適當稀釋后重復測定。
3、競爭法
用于測定小分子抗原，如藥物、激素等。原理為先用抗小分子的特異性抗體包被固相，然后同時加入待測樣本和酶標記的小分子，兩種小分子競爭與固相上的抗小分子的特異性抗體結(jié)合，溫育一定時間后洗滌，加入酶底物顯色。
特點：
?、倜笜擞浛乖c樣品或標準品中的非標記抗原具有相同的與固相抗體結(jié)合的能力；
?、诜磻w系中，固相抗體和酶標抗原是固定*，且前者的結(jié)合位點少于酶標記和非標記抗原的分子數(shù)量和；
?、勖庖叻磻?，結(jié)合于固相載體上復合物中被測定的酶標抗原的量(酶活性)與樣品或標準品中非標記抗原的濃度成反比。
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