使用核酸提取類試劑盒必須掌握一系列手段

發(fā)布日期： 2020-02-26

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　　核酸提取類試劑盒采用異硫氰酸胍及表面活性劑聯(lián)合裂解細(xì)胞技術(shù)，添加*的病毒凝集劑，不需要進(jìn)行仿抽提，可從細(xì)胞培養(yǎng)物、血漿、血清、分泌液、腹水、拭子等的樣本中快速提取痕量的病毒或細(xì)胞的核酸（DNA和RNA）。

　　1、取待抽提的血清50μl置于微型離心管中，加入200μl抽提A液，顛倒數(shù)次充分混勻；（混勻后室溫放置5分鐘可達(dá)到效果）

　　2、加入250μl抽提B液，顛倒數(shù)次充分混勻（混勻后室溫放置10min可達(dá)效果），13000rpm離心10min，倒去上清；
3、加入200μl抽提C液，顛倒數(shù)次混勻，13000rpm離心5min，吸棄上清（盡量去掉上清）；

　　4、室溫放置或50℃加熱5min晾干，加入25μl樣本稀釋液混懸沉淀物，短暫離心使液體落于管底部，上清液即為提取得到的核酸。

　　注：對于分泌物或棉拭子，先用適量無菌生理鹽水把拭子上的分泌物洗入離心管中，或者把拭子泡在無菌生理鹽水中，捻動使分泌物分散于液體中，然后高速離心5min后，去除大部分上清，余下的樣本即應(yīng)用上述步驟抽提核酸。

　　注意事項：

　　1、如果抽提的是病毒RNA，即提即用，保存請置于-80℃。

　　2、抽提A液及抽提B液可根據(jù)所用的提取物的量等倍加大用量。

　　3、抽提A液低溫保存會有絮狀物析出或凝結(jié)是正?，F(xiàn)象，使用前置于50℃使融化，顛倒混勻，不影響使用。

　　4、血漿樣本盡管也能直接提取，但先用紅細(xì)胞裂解液處理去掉紅細(xì)胞，效果將更好。

　　5、加入樣本稀釋液后仍有部分沉淀不溶解是正?，F(xiàn)象，不影響后續(xù)實驗。

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